При применении РА для обнаружения в сыворотке больных антител к соответствующему патогенному микробу либо, как коротко говорят, в целях серодиагностики берут 5 мл крови, приобретают сыворотку и разводят ее изотоническим раствором натрия хлорида от 1:50–1:100 до 1:800–1:1600, так как в более низких ее титрах смогут пребывать обычные агглютинины, имеющиеся у здоровых людей либо у больных с другим диагнозом.
В качестве Аг в данной реакции применяют заведомо узнаваемые взвеси убитых мкO (ДИАГНОСТИКУМЫ), с которыми безопасно трудиться
РА для серодиагностики ставится и учитывается равно как и развернутая РА для определения вида бактерий. Диагностическое значение имеют титры 1:100–1:200 и выше.
Более точные результаты дает обнаружение нарастания титра антител в парных сыворотках, взятых от больного в начале заболевания и спустя 3–5 дней и более, в то время, когда титр агглютининов увеличивается под действием находящегося в организме патогенного микроба.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, вирусов и риккетсий, иммунные комплексы которых с агглютининами в простых хороших РА заметить не удается, либо же для обнаружения антител в сыворотках больных к этим мельчайшим микроорганизмам и высокодисперсным веществам.
РНГА для серодиагностики инфекционных заболеваний. Применяя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДИАГНОСТИКУМЫ. Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную свойство. После этого их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37°С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают изотоническим раствором натрия хлорида и додают к сыворотке, разведенной и разлитой в лунки панелей. Контролем помогают взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, каковые вносят в сыворотки, дающие заведомо хорошую и отрицательную реакции.
Результаты реакции учитывают через 2 ч по окончании инкубации в термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты покрывают лунку в виде зонтика с неровными краями; «–» – скопление эритроцитов в виде «пуговицы»
23. Реакция преципитации. Её модификации.
Реакцией преципитации (РП) именуется осаждение из раствора Аг (преципитиногена) при действии на него иммунной сыворотки (преципитина) и электролита. При помощи РП возможно распознать антиген в разведениях 1:100 000 а также 1:1 000 000, т. е. в таких малых количествах, каковые не обнаруживаются химическим методом.
Преципитиногены являются ультрамикроскопические частицы протеиново–ПС прир: экстракты из мкO, органов и тк, пат материала; продукты распада бактериальной клетки, их лизаты, фильтраты. Преципитиногены владеют термоустойчивостью, исходя из этого для их получения материал подвергается кипячению. В РП употребляются жидкие прозрачные Аг.
Преципитирующие сыворотки в большинстве случаев приобретают гипериммунизацией кроликов циклами в течение нескольких месяцев, вводя им бактериальные взвеси, фильтраты бульонных культур, аутолизаты, солевые экстракты микроорганизмов, сывороточные белки.
Постановка РП Асколи. В узкую пробирку с маленьким кол-вом неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медлительно по стенке наслаивается такой же количество Аг. Дабы не смешать две жидкости, пробирку с опаской ставят вертикально. При хорошей реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции непременно сопровождается контролями антигена и сыворотки.
Реакция Асколи используется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг. Она отыскала кроме этого использование в судебной медицине для опред-я видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при обнаружении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недочётом данной РП есть нестойкость преципитата (кольца), что исчезает кроме того при легком встряхивании. Помимо этого, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.
Реакция преципитации Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля применяют отлично отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, дабы лунки, которые содержат их, пребывали на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь между собой, антиген и антитело образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы. При наличии сложного по составу преципитиногена появляется пара полос. Наряду с этим полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что разрешает выяснить подробности антигенной структуры исследуемых веществ. Обширно употребляется для диагностики болезней, вызываемых бактериями и вирусами, продуцирующими экзотоксины.
24. Реакция связывания комплемента. практическое использование и Механизм.
Реакция связывания комплемента (РСК) – сложная двухэтапная серологическая реакция. В ней применяют пять ингредиентов, составляющих две совокупности: антиген, антитело, комплемент (первая совокупность); эритроциты барана, сенсибилизированные (обработанные) гемолитической сывороткой, содержащей своеобразные к ним антитела (вторая, либо индикаторная, гемсистема). Наряду с этим сотрудничество антитела с антигеном на первой стадии реакции ведет к образованию иммунного комплекса, что адсорбирует комплемент, но визуально найти это нереально. В качестве индикатора связывания комплемента на комплексе антиген–антитело на втором этапе применяют гемсистему, которая, являясь иммунным комплексом, также способна адсорбировать его. В конечном счете вероятны два варианта результата реакции. В случае, если антиген и антитело соответствуют друг другу и комплемент адсорбируется появившимся комплексом, лизиса эритроцитов гемсистемы не случится. При несоответствии антитела антигену, и напротив, комплемент, оставаясь свободным, присоединится к гемсистеме и приведёт к гемолизу.
Как и другие серологические реакции, РСК возможно применять для обнаружения своеобразных антител по известному антигену либо для определения антигена по известным антителам.