- Способ Цейсслера. Исследуемый материал сеют штрихами по поверхности плотной среды. Создают анаэробные условия. И инкубируют при 37 градусах 24-72ч. Изолированные колонии анаэробов пересевают на среду контроля стерильности либо среду Китта-Тароцци.
- Способ Вейнберга. Пара капель исследуемого материал вносят в пробирку с 4-5мл изотонического раствора. Перемешивают запаянным капилляром переносят в пробирку с охлажденным до 45-50 градусов сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. По окончании перемешивания этим же капилляром засевают еще две пробирки с сахарным агаром и скоро охлаждают под струей воды. Выросшие в глубине колонии пересевают на СКС либо среду Китта-Тароцци.
- Способ Перетца. Готовят разведение материала, как указано выше. Содержимое пробирки с соответствующим разведением выливают в чашку Петри, на дне которой на двух палочках лежит стеклянная пластина 6х6см. среду заливают так, что бы она заполнила пространство между дном чашки и пластиной. При появлении роста пластинку поднимают и чистые колонии пересевают.
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов применяют способы, основанные на:
1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
2. Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное воздействие;
3. Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
Способ Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).
2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.
II этап.
1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии.
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим показателям и тинкториальным показателям клетки). Идентификация проводится по:
— ферментативным особенностям.
— антигенным особенностям фагочувствительности токсигенности и вторым показателям
В практике применяются следующие физические способы стерилизации.
1. Стерилизация сухим жаром. Стерилизуемый объект нагревают в сушильном шкафу при температуре 180 °С в течение-20-60 мин либо при 200 °С в течение 10-30 мин. Сухим жаром стерилизуют стеклянную и фарфоровую посуду, жиры, вазелин, глицерин, термоустойчивые порошки (каолин, стрептоцид, тальк, кальция сульфат, цинка окись и др.).
В сушильных шкафах нельзя стерилизовать водные растворы в склянках, поскольку вода при больших температурах преобразовывается в пар и склянка возможно порвана.
2. Стерилизация мокрым жаром. При применении этого метода стерилизации комбинируются действие большой влажности и температуры. В случае, если сухой жар вызывает в большинстве случаев пирогенетическое разрушение микроорганизмов, то мокрый жар — коагуляцию белка, требующую участия воды.
На практике стерилизацию мокрым жаром создают при температуре 50-150 °С и реализовывают следующими методами.
Кипячение. Этим методом стерилизуют резиновые предметы, хирургический инструментарий, стеклянную посуду. Использовать кипячение для стерилизации инъекционных растворов не рекомендуется, поскольку по эффективности оно существенно уступает стерилизации паром.
Стерилизация текучим паром. Текучим именуете» насыщенный пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100 °С. Стерилизацию текучим паром реализовывают в паровом стерилизаторе либо автоклаве при 100 °С в течение 30-60 мин в зависимости от количества раствора. Это один из распространенных способов стерилизации инъекционных растворов в аптеках.
Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Осуществляется в автоклавах различной конструкции.. Автоклав представляет собой герметически закрывающийся сосуд, складывающийся из толстостенной кожуха и стерилизационной камеры (рис. 36). На автоклаве имеются предохранительный клапан, снабжающий выход пара при избыточном давлении, и манометр. При каждом автоклаве должны быть инструкция по его эксплуатации и уходу, и паспорт котлонадзора.
Стерилизуемый объект помещают вовнутрь паровой камеры. Водяную камеру подвергают нагреванию. Сначала автоклав нагревают при открытом кране , пока пар не отправится сильной целой струей и не вытеснит находящийся в автоклаве воздушное пространство, что существенно снижает теплопроводность пара (при содержании в водяном паре 5% воздуха она значительно уменьшается на 50 %)
3. Дробная стерилизация. При дробной стерилизации объект (в большинстве случаев водный раствор) нагревают текучим паром при 100 °С в течение 30 мин, после этого раствор выдерживают при комнатной температуре 24 ч, по окончании чего опять стерилизуют в тех же условиях (30 мин при 100 °С). Обрисованный цикл повторяют 3- 5 раз. При первом нагревании погибают вегетативные формы микроорганизмов, при последующих — снова показавшиеся вегетативные формы. Благодаря длительности данный метод в аптеках используется редко.
4. Пастеризация — однократное нагревание объекта при температуре 60 °С в течение 1 ч либо при температуре 70-80 °С в течение 30 мин. Разрешает стереть с лица земли вегетативные формы микробов (не считая термофильных), но не споры.
5. Тиндализация (дробная пастеризация). При тиндализации объект нагревают при температуре 60-65 °С по 1 ч ежедневно-в течение 5 дней либо при 70-80 °С в течение 3 дней. Это надежный и бережный метод стерилизации термолабильных: лекарственных веществ. Но благодаря длительности он мало пригоден для аптек и в последних практически не употребляется.